W losowaniu biorą udział 64 kluby:
– 16 klubów z PKO Ekstraklasy;
– 18 klubów z Fortuna 1 Ligi;
– 10 klubów z II ligi (bez beniaminków i drużyn z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019);
– 4 zwycięzców rundy wstępnej (drużyny II ligi z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019 po rozegraniu 1 meczu);
– 16 zdobywców Pucharu Polski w WZPN w sezonie 2018/2019.

Dwa koszyki:
W pierwszym: 4 kluby – uczestnicy Ligi Mistrzów i uczestnicy Ligi Europy w sezonie 2019/2020 – Piast Gliwice, Legia Warszawa, Lechia Gdańsk, Cracovia;
W drugim: 60 klubów – pozostałe kluby.

W pierwszej kolejności do 4 klubów z pierwszego koszyka dolosowujemy przeciwników z drugiego koszyka. Następnie losujemy kolejne pary używając kul tylko z drugiego koszyka.

Gospodarzami meczów 1/32 finału Totolotek Pucharu Polski są drużyny występujące w niższej klasie rozgrywkowej. W przypadku drużyn występujących w tej samej klasie rozgrywkowej, gospodarzami są drużyny, które podczas losowania danej pary zostały wylosowane jako pierwsze. Jeśli do klubu z pierwszego koszyka zostanie dolosowany klub PKO Ekstraklasy z drugiego koszyka, to gospodarzem jest klub z pierwszego koszyka.

Mecze 1/32 finału Totolotek Pucharu Polski odbędą się w dniach 24, 25 i 26 września 2019 roku.