W losowaniu biorą udział 64 kluby:
– 16 klubów z PKO Ekstraklasy;
– 18 drużyn z Fortuna 1 Ligi;
– 10 klubów z II ligi (bez beniaminków i drużyn z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019);
– 4 zwycięzców rundy wstępnej (drużyny II ligi z miejsc 11-18 z sezonu 2018/2019 po rozegraniu 1 meczu);
– 16 zdobywców Pucharu Polski w WZPN w sezonie 2018/2019.

Gospodarzami meczów 1/32 finału Totolotek Pucharu Polski są drużyny występujące w niższej klasie rozgrywkowej. W przypadku drużyn występujących w tej samej klasie rozgrywkowej, gospodarzami są drużyny, które podczas losowania danej pary zostały wylosowane jako pierwsze.

W sytuacji, gdy jedną parę utworzą drużyny PKO Ekstraklasy, z których jedna wywalczyła w ubiegłym sezonie awans do europejskich pucharów, gospodarzem meczu będzie drużyna uczestnicząca w tych rozgrywkach.